文章标题：LC-MS/MS法定量测定人血浆中的羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸，并对检测结果进行临床衰老研究分析应用
客户单位：航空总医院/北京医院
汇智泰康提供服务：建立和验证CML和CEL的含量检测的LC-MS/MS方法，完成上千例人血浆中CML和CEL的含量检测
文章概要：
【研究背景】
医学研究表明，随着年龄的增长，晚期糖基化终末产物（AGEs）能够在血清、组织中生成和积聚，并参与糖尿病慢性并发症、动脉粥样硬化、尿毒症、阿尔茨海默病、白内障等多种疾病和衰老的发生和发展。评价AGEs对人类健康的影响，需要准确可靠的方法对适合的生物标志物进行测定。目前已发现的AGEs有20多种，包括羧甲基赖氨酸（Nε(Carboxymethyl)lysine，CML），羧乙基赖氨酸（Nε-(Carboxyethyl)lysine，CEL），吡咯素（pyrraline）和戊糖素（pentosidine）等。CEL和CML与衰老以及疾病密切相关，如糖尿病并发症和肾衰竭等。建立一个高效准确的定量方法对CML和CEL等含量进行测定，对临床进一步研究CML和CEL与年龄的相关性，评估人群的健康状态等具有重要的意义。
国内外对生物样本中CML和CEL的测定方法有色谱分析法、酶联免疫吸附剂测定法等，但这些方法都存在一定的局限性，如操作复杂，费时费力，灵敏度低等。本实验拟建立高效、灵敏、准确、专属性强的LC-MS/MS方法，并用于测定人血浆中CML和CEL的含量。
【研究方法】
人血浆样本经全氟戊酸水溶液孵化，三氯乙酸沉淀，盐酸水解，氮气吹干，最后使用全氟戊酸水溶液复溶，过滤后，同时加入Cotinine-D3作为内标，选用Agela Venusil ASB C18色谱柱（50 mm ×4.6 mm，5 μm），以5 mmol·L-1 全氟戊酸水溶液-含0.15%甲酸的乙腈：水=60:40（v/v）为流动相进行分离；选用多重反应监测（MRM）扫描方式进行监测CML、CEL和Cotinine-D3，选择监测离子对分别为：CML选用m/z 205.2-->84.1（定量）和m/z 205.2-->m/z 130.0，CEL选用m/z 219.1-->84.1（定量）和m/z 219.1-->m/z 130.1，Cotinine-D3选用m/z 180.1-->80.1。
【研究结果】
CML和CEL分离的总时间在6分钟内完成。CML，CEL和Cotinine-D3的保留时间分别为3.43min，3.46 min和4.50 min；血浆中CML和CEL的线性范围均为0.025~1.500 μmol·L-1，定量下限：CEL和CML均为 0.025μmol·L-1；日内、日间相对标准偏差（RSD）均低于9%；相对偏差（RE）均在±4%的范围以内。平均提取回收率：CML为94.24%，CEL为：97.89%。
【研究结论】
结果表明，该方法快速、灵敏高、专属性强、重现性好，适用于临床人血浆样本中CML和CEL的快速检测；临床增龄研究项目结果表明，该两种指标对于人的衰老研究具有重要的指征意义。
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汇智泰康的分析测试实验室是以质谱分析为核心能力的分析检测平台，可对内源及外源化合物进行精准定量、定性分析。实验室配备了多套质谱AB SCIEX 质谱分析仪（LC-MS/MS），其中包括TRIPLE QUAD 5500、API 5000、API 4000 QTRAP以及QTOF 5600+，还配有多台气质和气质质联用仪 （GC-MS&GC-MS/MS）、高效液相色谱、元素分析仪（Thermo ICP-MS）、原子吸收（AAS）、原子荧光（AFS）等检测仪器。此外还配备有大量的分析相关的仪器及辅助设备。
