寡核苷酸疗法是一种新兴的治疗方式，通过专门设计合成修饰的RNA或RNA/DNA 杂交体，以改变RNA和/或蛋白质表达调控疾病基因转录，被美国食品药品管理局（FDA）或欧盟批准用于治疗罕见病。近年来，寡核苷酸药物取得了长足的进步，截至2022年1月，全球已获批上市的小核酸药物共有14款，包括4款小干扰RNA（siRNA）药物，9款反义寡核苷酸（ASO）和1款核酸适配体(Aptamer)（行研报告 小核酸药物行业，36，2022.1.11）。截至目前，有超50款处于临床实验阶段。

FDA于2022年6月出台了《Clinical Pharmacology Considerations for the Development of Oligonucleotide Therapeutics Guidance for Industry》，提供了帮助行业开发寡核苷酸疗法的建议，涉及药代动力学、药理学和安全性评估。《指南》就何时进行这些评估以及何种类型的评估适合解决哪些问题提供了建议。

为了满足寡核苷酸药物的研发需求，汇智泰康凭借多年来在生物医药研发、生物安全评价和分析检测领域积累的技术、方法和项目经验，开发了针对寡核苷酸药物的血浆蛋白结合试验方法，构建了寡核苷酸药物的临床前药物研发服务体系，可以承接寡核苷酸药物临床前实验相关研究工作，具体描述如下：

1.血浆蛋白结合率（plasma protein binding，PPB）试验

       PPB通过检测药物入血后与血浆蛋白结合形成结合态药物的比例，判断药物在血浆中的存在形式，为药物作用机理研究、药物活性研究、用药方法研究等提供参考数据。实验过程包括：RNA与蛋白结合孵育过程，游离药物分离过程（可根据药物特点选用平衡透析法（ED）、超滤法（UF）、固相萃取法（SPE）等），和游离药物检测（可选用高效液相色谱-质谱（LC-MS、LC-MS/MS）、荧光标记RNA的液相色谱-荧光检测（LC-FLD）、实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测法等。血浆可以根据需要选择人、猴、犬、大鼠、小鼠等不同种属。

图1 RNA蛋白结合率试验过程示意图

图2 某RNA-荧光标记物的色谱图

2.体外药物代谢实验

体外代谢研究可通过直接考察候选化合物与受试靶点的选择性作用，主要涉及代谢产物鉴定、代谢稳定性、以及药物代谢性相互作用等。代谢产物鉴定，可通过LC-MS/MS和高分辨质谱（Triple QTOF-MS）进行分子量鉴定，进而推断代谢路径。

代谢稳定性实验，如血浆代谢稳定性、肝微粒体代谢稳定性、肝细胞代谢稳定性等，均可涉及人、猴、犬、大鼠、小鼠等多个种属。对于血浆代谢稳定性，可以通过LC-MS/MS测定从血浆中提取（可采用Trizol提取法、蛋白K酶消解法、固相萃取法、磁珠杂交提取法等）得到的RNA。对于肝微粒体代谢和肝细胞代谢，可以先应用LC-MS/MS和Triple QTOF-MS对其代谢产物进行鉴定，进而应用LC-MS/MS进行定量分析。

药物代谢性相互作用研究，可根据国家药监局药审中心发布的《药物相互作用研究技术指导原则（征求意见稿）》开展相关实验和研究。

3.动物药理药效安全评价实验

可开展大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠、兔、猴、小型猪、犬等临床前研究动物实验。

汇智泰康寡核苷酸药物研发相关配套仪器设备：

• 核酸电泳仪（BAYGENE-BG-POWER 600 等）
• PCR扩增仪（美国伯乐T100 等）
• 酶标仪（美国博腾ELx808等）
• 蛋白纯化仪（利穗科技APPS 50D等）
• 一体化凝胶成像仪（北京赛智SmartGel 140 等）
• 高速冷冻离心机（GL-21M 等）
• 高效液相色谱仪（紫外、荧光）（ Agilent1200 Series等）
• 液相色谱-质谱联用仪（AB SCIEX TRIPLE QUAD 5500、API 5000、QTRAP 4500、Triple QTOF 5600+等）